Лабораторните тестове за диагностициране на COVID-19, които понастоящем се прилагат на практика, според препоръките на международните експерти, се преглеждат и оценяват.
COVID-19 болест, който произхожда от Ухан Китай, досега е засегнал повече от 208 страни. През последните няколко месеца научната общност в целия свят беше поставена пред значително предизвикателство да се развива диагностични тестове за Covid-19 откриване на заболяване с цел скрининг на пациенти и заподозрени лица с цел ефективно управление и контрол на пандемията.
Преди да оценим настоящите методи и практики, използвани за откриване на COVID-19, нека първо разберем какво причинява COVID-19 и как се разработват диагностични тестове за скрининг на пациентите за това заболяване. Заболяването на COVID-19 се причинява от положително напрегната РНК вирус които са зоонози, което означава, че могат да преминават през видовете бариери от животни към хора и могат да причинят при хората заболявания, вариращи от обикновена настинка до по-тежки заболявания като MERS и SARS. Вирусът, причиняващ COVID-19, вече е наречен SARS-CoV-2 от Международния комитет по таксономия на вирусите (ICTV), тъй като е много подобен на този, който е причинил огнището на SARS (SARS-CoVs). Диагностичният тест за болестта COVID-19 може да бъде разработен по няколко начина.
Най-популярният и понастоящем приет метод в световен мащаб е разработването на диагностичен тест, който може да открие самия вирус SARS-CoV-2. Това тест се основава на откриването на вирусния геном в пробата на пациента чрез RT-реално време PCR (полимеразна верижна реакция с обратна транскриптаза в реално време). Това включва превръщане на вирусна РНК в ДНК с помощта на ензим, наречен обратна транскриптаза, и след това амплифициране на ДНК с помощта на специфичен набор от праймери и флуоресцентна сонда, които се свързват със специфичен регион на вирусната ДНК, като се използва Taq полимераза и се открие флуоресцентния сигнал. Тези тестове се наричат NAATs (тестове за амплификация на нуклеинова киселина). Тази техника може да бъде много полезна за много ранно откриване на наличието на нуклеинова киселина в пробата на пациента, дори при асимптоматични пациенти, които не показват симптоми на заболяването COVID-19 (особено в инкубационния период от 14-28 дни) и в по-късната част както и когато болестта е в пълна степен.
Различни компании по света работят в надпревара с времето през последните няколко месеца, за да разработят базиран на NAAT диагностичен тест за откриване на SARS-CoV-2 въз основа на CDC (Център за контрол на заболяванията), Атланта, САЩ и насоките на СЗО ( 1). Здравните власти по света одобряват тези тестове за спешна употреба за откриване на SARS-CoV-2. Вирусните гени, насочени досега, включват гените N, E, S и RdRP, заедно с подходящи положителни и отрицателни контроли. Пробите на пациента, които трябва да бъдат взети за такъв тест, са от горните дихателни пътища (назофарингеален и орофарингеален тампон) и/или долните дихателни пътища (храчки и/или ендотрахеален аспират или бронхоалвеоларен лаваж). Възможно е обаче да се открие вирус и в други проби, включително изпражнения и кръв. Пробите трябва да бъдат събрани бързо по подходящ начин, като се вземат всички необходими предпазни мерки и се придържат към практиките за биологична безопасност (съгласно насоките, определени от СЗО[2]), от пациенти, отговарящи на дефиницията на предполагаемия случай за COVID-1, като се съхраняват и опаковат добре, ако трябва да бъде транспортиран до диагностичния център и след това обработен (екстрахиране на РНК в шкаф за биобезопасност в BSL-19 или еквивалентно съоръжение) бързо по начин, за да се гарантира целостта на пробата. Всичко това трябва да се извършва приоритетно за по-добро клинично управление и контрол на огнището.
Времето за откриване за различни налични тестове, базирани на NAAT, разработени от големи диагностични компании по света, варира от 45 минути до 3.5 часа. Правят се различни подобрения в тези тестове, за да се превърнат в тестове за точка на грижа и да се постигнат желаните резултати за възможно най-малко време, без да се компрометира точността на резултата, за да се увеличи броят на тестовете, които могат да бъдат направени за един ден.
Други опции за диагностични тестове са бързи диагностични тестове (RDT) които или откриват вирусни антигени/протеини, които се експресират на повърхността на вирусните частици на SARS-CoV-2, докато се репликират в клетките гостоприемници и причиняват заболяване или антитела на гостоприемника в отговор на инфекция; този тест открива наличието на антитела в кръвта на хора, за които се смята, че са били заразени с COVID-19 (3).
Точността и възпроизводимостта на RDT за откриване на вирусни антигени зависи от няколко фактора, включително времето от началото на заболяването, концентрацията на вируса в пробата, качеството и обработката на пробата и формулировката на реагентите, присъстващи в тестовите комплекти. Поради тези променливи, чувствителността на тези тестове може да варира от 34% до 80%. Основен недостатък на тази опция е, че вирусът трябва да бъде в репликативен и инфекциозен стадий, за да открие вирусните протеини.
По подобен начин тестовете за откриване на антитела на гостоприемника се основават на силата на отговора на антителата, която зависи от фактори като възраст, хранителен статус, тежест на заболяването и определени лекарства или инфекции, които потискат имунната система. Основен недостатък на тази опция е, че антителата се произвеждат в продължение на дни до седмици след заразяването с вируса SARS-CoV-2 и човек трябва да изчака толкова дълго, за да извърши теста. Това означава, че диагнозата на инфекция с COVID-19 въз основа на отговора на антителата на гостоприемника често ще бъде възможна само във фазата на възстановяване, когато много от възможностите за клинична интервенция или превенция на предаването на заболяването вече са преминали.
Понастоящем споменатите по-горе RDT са одобрени само в изследователска среда, а не за клинична диагноза поради липса на данни (3, 4). Тъй като все повече и повече епидемиологични данни стават достъпни за COVID-19, повече RDT ще бъдат разработени и одобрени като тестове за грижа в клинична среда, тъй като могат да дадат резултати за 10-30 минути, за разлика от тестовете, базирани на NAAT, които средно отнемат няколко часа за откриване на заболяването.
***
Литература:
1. СЗО, 2020 г. Препоръки за стратегия за лабораторно тестване за COVID-19. Временно ръководство. 21 март 2020 г. Предлага се онлайн на адрес https://apps.who.int/iris/bitstream/handle/10665/331509/WHO-COVID-19-lab_testing-2020.1-eng.pdf Посетен на 09 април 2020 г
2. CDC 2020. Информация за лаборатории. Временно ръководство за лаборатории, достъпно онлайн на адрес https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-nCoV/lab/index.html Посетен на 09 април 2020 г.
3. СЗО, 2020 г. Съвети относно използването на тестове на място. Научно резюме. 08 април 2020 г. Предлага се онлайн на адрес https://www.who.int/news-room/commentaries/detail/advice-on-the-use-of-point-of-care-immunodiagnostic-tests-for-covid-19 Посетен на 09 април 2020 г.
4. ECDC, 2020 г. Преглед на ситуацията с бързи тестове за диагностициране на COVID-19 в ЕС/ЕИП. 01 април 2020 г. Европейски център за превенция и контрол на заболяванията. Предлага се онлайн на https://www.ecdc.europa.eu/en/publications-data/overview-rapid-test-situation-covid-19-diagnosis-eueea Посетен на 09 април 2020 г
***
